PCR reaksiýalarynda päsgelçilik faktorlary

PCR reaksiýasynyň wagtynda käbir päsgelçilikli faktorlar köplenç ýüze çykýar.
PCR-iň gaty ýokary duýgurlygy sebäpli, hapalanmak PCR netijelerine täsir edýän iň möhüm faktorlardan biri hasaplanýar we ýalan oňyn netijelere sebäp bolup biler.
Esasan akylly netijelere eltýän dürli çeşmelerdir. PCR garyndyjynyň bir ýa-da birnäçe möhüm bölegi ýa-da has möhüm bir aýratyn bölek bolsa, anyklaýyş sazlamasy päsgelçilik döredilip bilner ýa-da päsgel berlen bolsa, anyklaýyş guramasy päsgelçilik döredilip bilner. Netijeliligini we hatda ýalňyş negatiw netijeleri azaltmaga we hatda ýalan negatiw netijelere sebäp bolup biler.
Girişden öň ýük daşamak we / ýa-da saklamak şertlerinde suprik kislotanyň bütewiligi sebäpli ýüze çykyp biler. Hususan-da, ýokary temperaturada ýa-da ýeterlik däl-de, ýeterlik däl-de, ýadyn kislotlarynyň zaýalanmagyna sebäp bolup biler. Öýjükli we dokuma düzgüni we Parapffin dagynyň dagynyň bölegi we tutanýerli mesele dürli esasly sebäpler we tutanýerli mesele (1-nji we 2-nji suratlara serediň). Bu ýagdaýlarda hatda optimal izolýasiýa we arassalanmak ýeňilleşdiriler.

1-nji surat | DNK bütewiliginde immobilizasiýa güýjüniň täsiri
Agarrose Gelrooshopois, "Eastpotes" bölümleriniň PRAPTORTLARY GÖRNÜŞLERDE DON-den izolýasiýa edilen DNA-nyň hiliniň ep-esli üýtgeýän Diniň hiliniň ep-esli üýtgemedigini görkezdi. Düzediş usulyna baglylykda ekstraktlarda dürli ortaça bölekleriň doktory derejesinde ýüze çykýardy. DNA diňe doňdurylan nusgalarda düzedilende we buferlenen bitarap farilde kesgitlenende saklandy. Güýçli kislotaly bogunly ýa-da aýrylmadyk, forma dnanyň ep-esli ýitgisine sebäp boldy. Galan bölegi ýokary bölegi ýokary derejededir.
Çep tarapdaky bölekleriň uzynlygy, tilreýde jübütlerde aňladylýar (KBP)

2-nji surat | Ýadrosynyň bitewiliginiň bütewiligini ýitirmek
(a) Iki çilimdäki 3'-5 'jyňňyrda, maksatly DNK-da arakesmä sebäp bolar. DNK-nyň sinteziýasy henizem kiçijik bölekde bolýar. Şeýle-de bolsa, bir prinorasamiýa saýlama sahypasy DNK-nyň bölekliginde ýitse, diňe çyzykly güýçlendiriji ýüze çykýar. Iň amatly ýagdaýda bölekler biri-birine hüjüm edip bilerler, ýöne hasyllary kiçi we çäklilik derejesi bolar.
(b) bazalaryň ýitmegi, esasan şekillendiriş we timidd etmek duýgusy sebäpli esaslary ýitirmek sebäpli, H-obligasiýalarynyň we TM-de azalýan H-obligasiýalarynyň we möwsüminiň azalmagyna getirýär. Giňden çykan ýylylyk tapgyrynda, premýer-ministrler Matrist DNN-den daşar berýärler we has berk şertlerdeem, hatda gizlin bolmasa.
(c) Goňşy ýumşaklyk bazalary tt ölçegi emele getirýär.
Molekulýar diagnostikalarynda köplenç ýüze çykýan başga bir umumy mesele, fhenol-chroororform çykarmak üçin maksatly ýadro kisloturnallarynyň has amatlydygy sebäpli. Gizlin ýagdaýlarda, ýalňyş negatiw bilen baglanyşykly bolup biler. Köp wagtlar gaýnat ýasaýjy ýa-da öýjükli galyndylary azdyrmagy ýa-da güýji ýeterlik däl, ýöne ýadro kislotasy sebäpli az mukdarda PCR duýgurlygyny pesel bilner.

Amallaşdyrmak wagtynda polimasiýa işjeňligini gadagan etmek işini gadagan etmek

Umuman, gadaganlyk, punkpimal PCR netijelerine sebäp bolýan ähli faktorlary suratlandyrmak üçin konteýner düşünjesi hökmünde örtülendiriň. Berk biohekiki manyda, dka polatorynyň işjeň saýtlary bilen gurşalandygyny, ýagny tof dna poliatro üçin özara täsiriň arkaly substratiki önümiň (mysal üçin, mg2 + gatnaşygynyň üsti bilen meşgullanýandygyny (meselem, mg2 +-sini döredýän) pudagyň özara täsir galdyrsylar).
Mysal ýa-da dürli buferlerde bölekler we öz içine alýan bölekler, ýerdäki dürli buferde ýerleşdirmek ýa-da kofe-ny azaltmak we ýeterlik ýa-da ýalňyş negatiw güýmenjesini herekete getirip biler.
Şeýle-de bolsa, haýsydyr biril-kislotalar we maksatly ýadrosip barýan ýadrosy dininji kislotatorlary öz içine alýan ýadro komponerleriniň arasynda köp sanly özara aragatnaşyklaryň köpüsi hökmünde bellendi. Öýjükiň bitewiligi izolýasiýa etmek bilen, ýadrosasiýanyň boşadyldy, nusganyň we onuň töweregindäki çözgüt we berk tapgyr bolup biler. Mysal üçin, "ýapyşmazlyk gämisi, ahyrsoňy PCR reakim eti arkaly iki ýa-da iki-nji gatlak dna barlanyp gonup bolýar we üznüksiz, üznüksiz sanlap, üzňe bökmek we arabolut we arassalamak bilen baglanyşyklydyr.
Umuman aýdanyňda, PCr iniathibitortikorlar kinetiki anyk synaglar üçin ulanylýan beden suwuklyklary we heparin dilinde (Ureldäki Urio, gyrmyzy, ýag, tok, ýag, ýag, chat upundikallar) we daşky gurşawdaky bölekler (fenollar, agyr metallar)

Mundan has köp ýaýramagy Bakteriýalar we gutaýtarik kadylaryndan, öwezini dolmanka däl DNKA-dan düzülen dna, DNK-Barrolit öýken makrommolalary, elliksli we plastmass ýaly dokma materolalary we galstukly maddalaryň bir bölegi bolup bilerler. Ýadrosyňy arassalamak wagtynda ýa-da çykarmak PCR inhibitorlaryny aýyrmak üçin ileri tutulýan usuldyr.
Häzirki wagtda dürli awtorlyk çykaryş enjamlary Köp elli protokollaryny çalşyp, 100% dikeldiş we ýa-da nyşanlary arassalamak hiç haçan ýetilmedi. Gyssagly bogunlar henizem arassalanan ýadro kislotalarynda bolup biler ýa-da eýýäm güýje giren bolmagy mümkin. Inhibiýalaryň täsirini azaltmak üçin dürli strategiýalar bar. Degişli poligasiýa saýlamak inhibritor işjeňligine ep-esli täsir edip biler. PCR pomersifikasiýasyny azaltmak Beýleki subut edilen usullar köpden köpelmegi ýa-da bza ýaly goşmaçalary artdyrýar ýa-da goşundylardan artdyrýar.
HKR-yň resminamalary gadagan edilmegi içerki prosesiň hil gözegçiligini ulanmak arkaly görkezilip bilner (IPC) ulanmak arkaly görkeziler.
Ethal, Ketos, GuşN, GuşN, SDS, Isopropanol we beýleki çözgütler, düýpli ýuwmak üçin ýadrosandan aýyrmak üçin ideg edilmelidir. Konsentrasiýasyna baglylykda, PCR-i işjeňleşdirip ýa-da saklaýarlar.